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流感疫苗生產(chǎn)的純化過程:
1. 已培養(yǎng)好的帶病毒的雞胚用75%酒精消毒;
2. 收集雞胚尿囊液:根據(jù)雞蛋大小收集量略有不同(每只6-10ml);
3. 尿囊液初濾JST型10μm濾芯過濾;
4. 連續(xù)流離心機(jī)或超濾系統(tǒng)過濾 ;
a. 連續(xù)流離心機(jī):日立R13C,用12,000rpm,流量:每分鐘600-800ml,除去雜質(zhì),上清液用于透析濃縮;
b. Millipore超濾系統(tǒng),0.45μm濾膜,除去雜質(zhì) ;
5. 尿囊液的透析濃縮:用Millipore超濾器,1000KD膜包濃縮,濃縮后通常為尿囊液量的1/30;
6. 超速離心的病毒純化;
7. 福爾馬林脫毒;
8. 乙醚裂解;
9. 100KD透析脫糖;
10. 去福爾馬林;
11. 去乙醚;
12. 幾種流行病毒抗原的混合(如H1N1+H3N2+H2N2)和稀釋 ;
13. 加入穩(wěn)定劑 ;
14. 成品 。
離心純化需要準(zhǔn)備的儀器和基本材料:
1. 儀器
a. 阿貝折射儀 Abbe refractometer (測蔗糖濃度)
b. Cole parmer 軟管泵:KH-77913-25
c. 紫外分光光度計(jì)或核酸蛋白分析儀(有280nm,260nm波長的),可以是帶流動池及記 錄儀,也可以是帶標(biāo)準(zhǔn)樣品池的)
2. 梯度液
a. PB緩沖液PH7.3
b. 30% w/w蔗糖液(Sucrose,Sigma,AR級)
c. 55% w/w蔗糖液
d. 58% w/w蔗糖液
3. 實(shí)驗(yàn)器具
a. 50ml有刻度玻璃管 100支
b. 500ml有刻度燒杯 5支
c. 100ml有刻度燒杯 5支
d. 1000ml有刻度量筒 3只
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