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高速離心機(jī)的離心分離方法和特點(diǎn)

     通常在第一次離心時(shí)把大部分不需要的大粒子沉降去掉。這時(shí)所需的組份大部分仍留在上清液中。然后將收集到的上清液以更高速度離心，把所需的粒子沉積下

來(lái)。離心的時(shí)間要選擇得當(dāng)，使大部份不需要的更小的粒子仍留在上清液中。對(duì)于得到的沉淀和上清液可以進(jìn)行進(jìn)一步的離心，直到達(dá)到所需要的分離純度為止。

    差速離心的特點(diǎn)是操作簡(jiǎn)單，但分離純度不高。

    B．密度梯度離心法：可以同時(shí)使樣品中幾個(gè)或全部組份分離，具有很好的分辨率。

    (1)速率區(qū)帶法(ratezonal)：

    根據(jù)樣品中不同粒子所具有的不同的尺寸大小及沉降速度(S)。大致步驟如下：

    在離心管中裝入密度梯度溶液，溶液的密度從離心管頂部至底部逐漸增加(正梯度)。

    將所需分離的樣品小心地加至密度梯度溶液的頂部。樣品在梯度溶液表面形成一負(fù)梯度。

    由于不同大小的粒子在離心力作用下，在梯度中移動(dòng)的速度不一樣，所以經(jīng)過(guò)離心后會(huì)形成幾條分開的樣品區(qū)帶。

    注意：樣品粒子的密度必須大于梯度液注中任一點(diǎn)的密度。離心過(guò)程必須在區(qū)帶到達(dá)管子底部前停止。

    (2)等密度離心法(isopycnic)：

    根據(jù)粒子的不同密度來(lái)分離。離心過(guò)程中，粒子會(huì)移至與它本身密度相同的地方形成區(qū)帶。

    密度樣度的選擇要使梯度的范圍包括所有待分離粒子的密度。樣品可以在密度梯度液粒上面或均勻分布在密度梯度中。經(jīng)離心后，樣品粒子達(dá)到它們的平衡點(diǎn)。

    注意：平衡后粒子的分離完全由其密度決定，與時(shí)間無(wú)關(guān)，此時(shí)再改變離心轉(zhuǎn)速，只能改變區(qū)帶的相對(duì)位置。